等电聚焦电泳色谱仪pH值梯度不稳定可能的七种原因

等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行分离。等电聚焦电泳技术在不断进步，却一直存在着pH值梯度不稳定的现象，即存在着pH梯度的阴极和阳极漂移现象。阴极漂移是指在等电聚焦电泳中pH梯度的碱性端逐渐消失的过程。反之，如果其酸性端逐渐消失则称为阳极漂移。

等电聚焦电泳（IFE，isoelectric focusing electrophoresis）是一种电泳方法，即利用一种特殊的缓冲液（两性电解质）在凝胶（常用聚丙烯酰胺凝胶）内制造一个pH梯度，电泳时每种蛋白质就将迁移到等于其等电点（pI）的pH处（此时此蛋白质不再带有净的正或负电荷），形成一个很窄的区带。

为了阐明等电聚焦电泳中pH值梯度不稳定的机制，提出了各种假说：

一、载体两性电解质向阴、阳极的等速电泳迁移。

二、在阴极因CO2的吸附而引起阴极液组分和浓度的变化。

三、在pH梯度的中性区域生成一段纯水，水的等电聚焦导致水在电泳柱中的聚集并向两端反流。

四、不同等电点的载体两性电解质的选择性缺陷而引起不稳定。

五、载体两性电解质带电配体的结合或分离而引起不稳定。

六、载体两性电解质相互反应的存在而引起不稳定。

七、相对迁移的氢离子和氢氧根离子浓度的不平衡。